Ⅰ.气相色谱法测定乙醛、乙醇含量
一、目的要求
学习利用气相色谱法测定果蔬组织中乙醛、乙醇含量的原理和方法。
二、基本原理
利用乙醛（Acetaldehyde）和乙醇（Ethanol）的易挥发性，顶空收集果蔬组织释放的乙醛、乙醇气体，通过气相色谱柱分离后，可以进行检测。
三、材料、仪器及试剂
（一）材料
苹果、梨、鲜枣。
（二）仪器及用具
研钵、电子天平、容量瓶（mL、0mL）、样品瓶（20mL，带密封橡胶塞）、移液器、气相色谱仪、色谱工作站、恒温箱、计时器、漏斗、滤纸。
（三）试剂
40%乙醛、无水乙醇，均为分析纯试剂。
四、实验步骤
（一）气相色谱配置及工作条件
气相色谱配置有氢火焰离子化检测器（FID）和Carbowax(5%)-Carbopac60/80填充柱，柱长2m，内径2mm。载气N2流速20mL/min。进样温度℃，柱温85℃，检测温度℃。
（二）制作标准曲线
用蒸馏水分别配制0、20、40、60、80、μL/L（v/v）的乙醛或乙醇溶液。取5.0mL乙醛或乙醇各溶液，分别移入到20mL样品瓶中，用橡胶塞密封后在60℃保温1h，顶空取1.0mL气体，在气相色谱仪进样口上进样测定，确定乙醛或乙醇的出峰时间，制作乙醛或乙醇溶液浓度-峰面积标准曲线。
（三）提取
称取20.0g果肉样品，加10.0mL蒸馏水研磨后，转入到mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗研钵，一并转入容量瓶，定容至刻度线，提取10min后，过滤，滤液用于乙醛和乙醇含量的测定。
（四）测定
取5.0mL提取液，移入到20mL小瓶中，用橡胶塞密封后在60℃保温1h，顶空取1.0mL气体进样用气相色谱测定。根据标准曲线，利用面积外标法，计算样品提取液中乙醛或乙醇的浓度。重复三次。
五、实验结果与计算
根据样品提取液中乙醛或乙醇的浓度，计算每克果蔬组织中含有的乙醛或乙醇的微克数，表示为μg/gFW。计算公式：
式中：
C——利用气谱法测的样品液中乙醛或乙醇的浓度，μL/L；
V——样品提取液体积，mL；
W——样品重量，g；
六、注意事项
1．还可选择弱极性毛细管色谱柱进行测定。
2．本实验中，将提取液移入到密闭样品瓶中，在60℃保温后形成乙醛或乙醇蒸汽，然后顶空取气进样测定。根据峰面积和标准溶液中乙醛或乙醇浓度标准曲线，利用面积外标法确定样品提取液中乙醛或乙醇含量。
Ⅱ.重铬酸钾氧化法测定乙醇含量
一、目的要求
学习利用重铬酸钾氧化、滴定法测定果蔬组织中乙醇含量的原理和方法。
二、基本原理
一般刚采收的果实乙醇含量极少（约0.04%左右），在贮藏中乙醇的含量逐渐增加。苹果中乙醇含量达到0.%时就能引起果实的伤害。因此，果蔬中乙醇的积累和变化情况，可以作为判断贮藏效果的依据。
重铬酸钾氧化法是测定果蔬中微量乙醇的常用方法。在浓硫酸存在的条件下，过量的重铬酸钾能将乙醇氧化为乙酸，而自身被还原成铬的硫酸盐。氧化乙醇后剩余的重铬酸钾可与碘化钾发生反应，生成游离的碘。游离的碘再被硫代硫酸钠滴定还原，根据滴定时消耗的硫代硫酸钠的量，可以推导、计算出氧化乙醇所消耗的重铬酸量，从而计算出果蔬中乙醇的含量。反应式如下：
CHCH2OH+2K2Cr2O7+8H2SO4→CHCOOH+2Cr2(SO4)+2K2SO4+11H2O
K2Cr2O7+6KI+7H2SO4→4K2SO4+Cr2(SO4)+7H2O+I2
2Na2S2O+I2→2NaI+Na2S4O6
三、材料、仪器及试剂
（一）材料
苹果、枣、梨、柑桔等。
（二）仪器及用具
电子天平、研钵、烧杯、容量瓶（、0mL）、圆底烧瓶（mL）、移液管（5mL、10mL、20mL）、酒精灯、石棉网、铁架台、漏斗、蒸馏头、冷凝管、磨口三角瓶（mL、mL）、滴定管（25mL）、量筒（20mL）、洗瓶、橡胶塞。
（三）试剂
1．浓硫酸。
2．碘化钾。
．0.5%淀粉溶液。
4．0.05mol/L标准重铬酸钾溶液：精确称取14.71g重铬酸钾（K2Cr2O7，分子量.21），用蒸馏水溶解后转入0mL容量瓶，稀释至刻度，混匀。
5．0.05mol/L硫代硫酸钠溶液：称取12.4g硫代硫酸钠（Na2S2O·5H2O，分子量.18），用蒸馏水溶解后转入0mL容量瓶，稀释至刻度，混匀。
硫代硫酸钠溶液的标定：吸取20mL标准重铬酸钾溶液置于mL的三角瓶中，缓缓加入5mL浓硫酸及2.00g碘化钾，盖上瓶塞后于暗处放置5min。取出后加入mL蒸馏水摇匀，用待标定的硫代硫酸钠溶液进行滴定。当溶液由橙色转为黄色时，加入5mL0.5%淀粉溶液摇匀，继续（缓慢地）滴定至溶液由兰色变成浅绿色为止。记录硫代硫酸钠用量，根据它与碘的反应式，计算出硫代硫酸钠溶液的摩尔浓度。
四、实验步骤
（一）乙醇的提取
称取20.0g果蔬样品置于研钵中，研磨后转入mL圆底烧瓶中，用mL蒸馏水洗涤研钵，将洗涤液一并转入烧瓶中。将烧瓶固定在铁架台上，安装上蒸馏头、冷凝管后，用一个mL容量瓶收集冷凝管中的蒸馏流出液。冷凝管的进水口、出水口通过橡胶管分别与自来水龙头和水槽连接。安装好后，放上石棉网，在瓶底加热煮沸混合液，收集蒸馏液于容量瓶中，至容量瓶中液面达到刻度线为止，盖上瓶塞，混合均匀。
（二）乙醇的氧化
吸取20mL标准重铬酸钾溶液置于mL的磨口三角瓶中，缓缓加入5mL浓硫酸，再加入10mL蒸馏液，振荡混匀。连接立式冷凝管，安装在铁架台上，放上石棉网上加热回流，使瓶中溶液轻微煮沸10min。
（三）游离碘的生成
待回流过的溶液冷却后，用约mL蒸馏水冲洗冷凝管，并全部无损地转入到原mL的磨口三角瓶。称取1.0g碘化钾加入到该磨口三角瓶中，振荡，塞上瓶塞，放置暗处保持5min。
（四）滴定
从暗处取出三角瓶后，自滴定管中滴加0.05mol/L硫代硫酸钠溶液。当三角瓶中溶液的颜色由橙色变为浅黄色时，加入5mL0.5%淀粉溶液。然后继续滴定，至溶液由兰色变为浅绿色时为止，记下消耗的硫代硫酸钠溶液的体积。
五、实验结果与计算
1．将测定的数据填入下列表
2．计算结果
根据硫代硫酸钠滴定消耗量，从反应式中推导出每克鲜重（FW）果蔬组织中乙醇含量（以质量百分比表示），计算公式如下：
式中：
V——样品重量，g；
V——样品提取液（馏出液）总体积，mL；
VS——吸取样品液体积，mL；
C0——标准重铬酸钾溶液浓度，mol/L；
V0——标准重铬酸钾用量，mL；
C1——硫代硫酸钠溶液标定浓度，mol/L；
V1——硫代硫酸钠溶液滴定消耗量，mL；